Związek wielolekowej oporności w epilepsji z polimorfizmem w genie transportera leków ABCB1 ad

Genotyp CC wiąże się zarówno z podwyższonymi poziomami, jak iz podwyższoną aktywnością białka ABCB1.12 Metody
Przedmioty
Badanie zostało zatwierdzone przez wspólny komitet ds. Etyki w National Hospital for Neurology and Neurosurgery oraz University College London Institute of Neurology w Londynie. Wszyscy pacjenci wyrazili pisemną, świadomą zgodę. Wszyscy pacjenci byli rekrutowani przez tę samą klinikę padaczki w National Hospital for Neurology and Neurosurgery i byli kolejnymi pacjentami z ustaloną kliniczną diagnozą padaczki (zdefiniowanej przez wystąpienie dwóch albo więcej niesprowokowanych napadów). Pacjenci byli uprawnieni, jeśli mieli padaczkę lekooporną lub reagującą na lek, zgodnie z następującymi definicjami i kryteriami. Oporność na leki zdefiniowano jako występowanie co najmniej czterech drgawek w ciągu roku przed rekrutacją z próbami więcej niż trzech odpowiednich leków przeciwpadaczkowych w maksymalnych tolerowanych dawkach, które ustalono na podstawie występowania klinicznych skutków ubocznych w dawkach supramaksymalnych. Tam, gdzie było to możliwe, uznano jedynie rozpoznane, bardziej specyficzne leki na zespół – na przykład niepowodzenie przypadku pierwotnej uogólnionej padaczki w odpowiedzi na karbamazepinę nie było uważane za niepowodzenie dla celów tego badania.
Reakcję na lek definiowano jako całkowitą wolną od napadów przez co najmniej rok, do daty ostatniej wizyty kontrolnej, u pacjentów z padaczką leczonych lekami przeciwpadaczkowymi. Spośród pacjentów, którzy zostali zaproszeni do udziału, sześciu odmówiło (mniej niż 2 procent). Osobnikami kontrolnymi były 200 kolejnych białych pacjentów z zaburzeniami neurologicznymi bez padaczki, którzy zostali zidentyfikowani z repozytorium DNA w Instytucie Neurologii. Pacjenci, którzy przeszli leczenie chirurgiczne z powodu padaczki lekoopornej, zostali sklasyfikowani jako chorzy na lekooporność niezależnie od wyniku zabiegu. Analizowano wszystkie DNA i wszystkie badania prowadzono w sposób zaślepiony.
Genotypowanie w ABCB1 3435
DNA ekstrahowano z próbek krwi według standardowych metod. Próbki od pierwszych 262 pacjentów i 90 osób kontrolnych genotypowano przez Epidauros zautomatyzowaną metodą na oczyszczonym genomowym DNA za pomocą testu TaqMan specjalnie opracowanego w celu rozróżnienia polimorfizmu C3435T ludzkiego genu ABCB1. Polimorfizm C3435T analizowano w próbkach od pozostałych pacjentów i kontroli w Wielkiej Brytanii przez bezpośrednie sekwencjonowanie z wykorzystaniem informacji dostarczonych przez Epidauros. Produkty amplifikowanej reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) sekwencjonowano za pomocą starterów do przodu i do tyłu, zestawu do sekwencjonowania cyklicznego Big Dye Terminator (Perkin Elmer) i automatycznego sekwencera (model 377, ABI). Sekwencje analizowano przy użyciu programu Sequence Navigator (Perkin Elmer).
Kontrola genomu
Aby zaradzić możliwości, że jakiekolwiek zaobserwowane różnice w częstości alleli pomiędzy odpornymi na leki i reagującymi na leki populacjami mogą wynikać z niespodziewanej struktury populacji, użyliśmy zestawu markerów genetycznych o pośrednich częstotliwościach alleli, które nie były związane z ABCB1. Zastosowane markery – polimorficzne markery insercyjne Alu – kod dla zmiennej długości powtórzeń reszty aminokwasowej.
Dziewięć polimorficznych markerów insercji Alu typowano na podstawie ich heterozygotyczności i umiejscowienia w ludzkim genomie.13,14 Polimorfizmy insercji Alu amplifikowano metodą PCR u wszystkich 315 pacjentów z epilepsją
[więcej w: usg pluc, korona na cyrkonie cena, silne leki przeciwbólowe na recepte lista ]
[hasła pokrewne: kaspazy, zakrzepica kafeteria, kompas będzin ]